《植物生理学报》 2005, 41(4): 509-512

DNA未知片段APCR克隆的优化

苗红梅^1,* 岳彩鹏² 赵永英¹

1 河南省农业科学院生物技术研究所，郑州 450002；2 郑州大学生物工程系，郑州 450052

通信作者：苗红梅；E-mail: miaohongmei@yahoo.com.cn；Tel: 0371-65751119

摘　要：

用锚定 PCR (APCR)技术对未知的小麦淀粉合成关键酶基因 gbss I 和 sbe II a 启动子序列进行扩增。通过对 APCR 反 应进行优化，获得了 gbss I 启动子序列(4.1 kb)和 sbe II a 启动子序列(3.1 kb)。结果表明：减少模板加入量(由 1 mL 降低至1/100 mL)和增大反应体积(由 50 mL 增到 100 mL)均可在一定程度上减少非特异的结果出现；升高变性温度(由 94℃提高到98℃)和延伸温度(由 55℃提高到 72℃)并延长延伸时间则能有效地消除 APCR 中的非特异性条带。

关键词：用锚定 PCR (APCR)技术对未知的小麦淀粉合成关键酶基因 gbss I 和 sbe II a 启动子序列进行扩增。通过对 APCR 反 应进行优化，获得了 gbss I 启动子序列(4.1 kb)和 sbe II a 启动子序列(3.1 kb)。结果表明：减少模板加入量(由 1 mL 降低至

收稿：2004-12-13   修定：2005-03-14

资助：河南省杰出人才创新奖金(0121000700)。

DNA未知片段APCR克隆的优化

苗红梅^1,* 岳彩鹏² 赵永英¹

1 河南省农业科学院生物技术研究所，郑州 450002；2 郑州大学生物工程系，郑州 450052

Corresponding author: ; E-mail: miaohongmei@yahoo.com.cn; Tel: 0371-65751119

Abstract:

用锚定 PCR (APCR)技术对未知的小麦淀粉合成关键酶基因 gbss I 和 sbe II a 启动子序列进行扩增。通过对 APCR 反 应进行优化，获得了 gbss I 启动子序列(4.1 kb)和 sbe II a 启动子序列(3.1 kb)。结果表明：减少模板加入量(由 1 mL 降低至1/100 mL)和增大反应体积(由 50 mL 增到 100 mL)均可在一定程度上减少非特异的结果出现；升高变性温度(由 94℃提高到98℃)和延伸温度(由 55℃提高到 72℃)并延长延伸时间则能有效地消除 APCR 中的非特异性条带。

Key words: 用锚定 PCR (APCR)技术对未知的小麦淀粉合成关键酶基因 gbss I 和 sbe II a 启动子序列进行扩增。通过对 APCR 反 应进行优化，获得了 gbss I 启动子序列(4.1 kb)和 sbe II a 启动子序列(3.1 kb)。结果表明：减少模板加入量(由 1 mL 降低至